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常見(jiàn)的核酸提取方法介紹

更新時(shí)間:2022-08-15      點(diǎn)擊次數:3441
核酸作為基因表達的物質(zhì)基礎,是分子生物學(xué)研究的主要對象。無(wú)論是進(jìn)行核酸的結構還是功能研究,首先都需要對核酸進(jìn)行提取和純化。核酸提取為大量廣泛研究和應用提供了基礎。常見(jiàn)的核酸提取方法有:

1、酚/氯仿抽提法

1956年發(fā)明,通過(guò)酚/氯仿處理細胞破碎液或者組織勻漿后,在水相中主要溶解以DNA為主的核酸成分,在有機相中主要是脂類(lèi)物質(zhì),蛋白質(zhì)位于兩相之間。酚/氯仿抽提的優(yōu)勢是成本低,對實(shí)驗條件要求較低。提取的DNA保持天然狀態(tài)。獲得的DNA純度高、片段大、效果好,缺點(diǎn)是操作較為繁瑣。

2、醇沉淀法

乙醇能夠消除核酸的水化層,使帶負電荷的磷酸基團暴露出來(lái),NA﹢等帶正電荷離子能與磷酸基團結合,形成沉淀。

3、層析柱法

通過(guò)特殊硅基質(zhì)吸附材料,能夠特定吸附DNA,而RNA和蛋白質(zhì)順利通過(guò),然后利用高鹽低PH結合核酸,低鹽高PH值洗脫,來(lái)分離純化核酸。

4、熱裂解堿法

堿法提取主要是利用共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒與線(xiàn)性染色質(zhì)在拓撲學(xué)上的差異來(lái)分離他們,在堿性下,變性蛋白是可溶的。

5、煮沸裂解法

加熱處理DNA溶液,利用線(xiàn)性DNA分子的特性,通過(guò)離心將DNA片段與變性蛋白質(zhì)和細胞碎片形成的沉淀分離。煮沸裂解法提取DNA,得量少,雜質(zhì)多,DNA可能會(huì )出現斷裂,主要適用于一些粗略的實(shí)驗。

6、納米磁珠法

運用納米技術(shù)對超順磁性納米顆粒的表面進(jìn)行改良和表面修飾后,制備成超順磁性氧化硅納米磁珠。該磁珠能在微觀(guān)界面上與核酸分子特異性地識別和高效結合。利用氧化硅納米微球的超順磁性,在Chaotropic鹽(鹽酸胍、異硫氰酸胍等)和外加磁場(chǎng)的作用下,從血液、動(dòng)物組織、食品、病原微生物等樣本中分離出DNA和RNA。

7、濃鹽法:高鹽沉淀法是酚氯仿抽提方法的一個(gè)變種,利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同,將二者分離。優(yōu)點(diǎn)事省略了酚氯仿抽提操作的麻煩,并且幾乎克服了酚氯仿抽提方法的一切缺點(diǎn),只是得到DNA的純度不夠穩定。 
 

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